ترومبوفیلی (Thrombophilia)  عارضه ای  است که به دلیل عدم تعادل در پروتئین‌ های لخته‌ کننده خون یا عوامل لخته‌ کننده ایجاد می شود و می تواند منجر به افزایش ریسک ایجاد ترومبوزهای وریدی شود. اختلالاتی که منجر به ترومبوفیلی می شوند در دو دسته ارثی و اکتسابی قرار می گیرند. ترومبوفیلی های ارثی شامل جهش در فاکتور V لیدن و فاکتور II پروترومبین می باشد.

فاکتور V Leiden نام یک جهش ژنی خاص  با الگوی اتوزومی غالب  ناشی از جهش نقطه ای G1691 در فاکتور V است که منجر به ترومبوفیلی و افزایش تمایل به تشکیل لخته های خون غیر طبیعی می شود که می تواند رگ های خونی را مسدود کند. افراد مبتلا به ترومبوفیلی فاکتور V لیدن بیشتر از حد متوسط در معرض خطر ابتلا به نوعی لخته خون به نام ترومبوز وریدی عمقی deep vein thrombosis)  DVT)  هستند. ترومبوفیلی فاکتور V لیدن همچنین خطر جدا شدن لخته ها از محل اصلی خود و حرکت در جریان خون را افزایش می دهد. اگرچه ترومبوفیلی فاکتور V لیدن خطر لخته شدن خون را افزایش می دهد، اما تنها حدود 10 درصد از افراد دارای جهش فاکتور V لیدن لخته های غیر طبیعی ایجاد می کنند. زنان مبتلا به این جهش دو تا سه برابر بیشتر در معرض خطر سقط جنین مکرر در سه ماهه دوم یا سوم هستند.

جهش فاکتور II پروترومبین (G20210A) یک عارضه ارثی است که فرد را در نتیجه افزایش سطوح پروترومبین در گردش، مستعد ایجاد لخته های خونی غیرطبیعی در ورید عمقی ( deep vein thrombosis DVT) و ریه ها و آمبولی ریوی  Pulmonary embolism) PE )) می نماید. میزان بروز آن در جمعیت عمومی 1 در 2 میلیون نفر تخمین زده می شود. کمبود فاکتور II یک اختلال اتوزومال مغلوب است، به این معنی که هر دو والد باید حامل ژن باشند تا آن را به فرزندان خود منتقل کنند و مردان و زنان را به طور مساوی تحت تأثیر قرار می دهد.

شماره رفرانس

BONThrombo FII&FV-24

BONThrombo FII&FV-96

شرح کیت

این کیت در 2 تیوب نرمال و موتان بر اساس واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) به صورت Real-Time ساخته شده است. این محصول برای تشخیص جهش‌های نقطه‌ای فاکتور V لیدن و فاکتور II پروترومبین در شرایط آزمایشگاهی تهیه شده و نتایج تشخیصی به‌دست‌آمده توسط این محصول باید همراه با سایر داده‌های بالینی یا آزمایشگاهی تفسیر شوند.

اصول

تشخیص آلل سالم و جهش یافته توسط واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) بر اساس تکثیر مناطق خاص ژنوم انسان می­باشد. در واکنش Real-Time PCR محصول تکثیر شده از طریق فلوروسنت شناسایی می‌شوند. مشاهده شدت فلوروسنت در حین واکنش PCR (به صورت Real-Time) تشخیص محصولات در حال تکثیر را بدون نیاز به باز­کردن مجدد لوله­ های واکنش پس از اجرای PCR ممکن می‌سازد. این کیت در قالب یک پلتفرم دو لوله ای مولتی پلکس طراحی شده است که قادر به تشخیص همزمان افتراقی دو آلل سالم و بیمار برای جهش فاکتور II پروترومبین و فاکتور V لیدن، به ترتیب با فلوروفورهای Cy5 و Texas Red می باشد.

موارد کاربرد

این کیت برای تشخیص همزمان افتراقی دو آلل سالم و بیمار برای جهش فاکتور II پروترومبین و فاکتور V لیدن به ویژه در تخمین ریسک ترومبوز، بررسی ریسک مخاطرات زایمانی، بررسی ریسک ترومبوفیلیا در اعضای خانواده فرد بیمار، تست تشخیصی برای بیماران دارای VTE (Venous thromboembolism) قبل از سن 50 یا VTE بدون علت در هر سن، خانم های دارای VTE مربوط به بارداری، استفاده از قرص های ضد بارداری یا (HRT) Hormone replacement therapy و درخانم های با سقط جنین بدون علت بعد از سه ماهه اول کاربرد دارد.

اختصاصیت بالا و تشخیص دقیق

• طراحی شده براساس ناحیه‌ی جهش یافته دو ژن
• دارای اختصاصیت 100% و تشخیص دقیق هموزیگوتها و هتروژیگوتها بر اساس اختلاف Ct داده شده

کنترل داخلی 

• از آنجا که فرد همیشه برای یکی از آللهای نرمال و یا جهش یافته باید مثبت باشد، کنترل داخلی در کیت لحاط نشده است.

حساسیت بالا

• حساسیت کیت برابر 1 نانوگرم در واکنش است.

مسترمیکس آماده­‌ی مصرف

• 2 مستر میکس نرمال  و جهش یافته در دو کانال نارنجی (FV) و کانال قرمز (FII) حاوی تمامی مواد تشکیل دهنده‌­ی مورد نیاز برای واکنش PCR
• بدون نیاز به اضافه کردن مواد ضروری برای انجام تست PCR
• تضمین تکرار پذیری نتایج آزمایش
• سازگار با طیف گسترده ای از دستگاه‌های Real-time PCR از جمله، Rotor Gen 3000,6000، MIC و ABI Quantstudio Real-time PCR System

• آنالیز نتایج

  آنالیز نتایج توسط نرم افزار مربوطه و بر اساس دستورالعمل دستگاه انجام شود. در کانال رنگی Orange, Red آستانه را روی گزینه‌ی Auto قرار دهید.

  آنالیز نتایج بر اساس محاسبه‌ی اختلاف Ct بین دو لوله‌ی Wild  و Mutant انجام می‌شود. 

   

  1. چنانچه نمونه در کانال نارنجی دارای منحنی سیگموئیدی و فاز لگاریتمی باشد:

  الف: اگر لوله‌ی wild حداقل 5 Ct کمتر از لوله‌ی mutant باشد، فرد برای جهش فاکتور v لایدن هموزیگوت سالم است.

  ب: اگر لوله‌ی mutant حداقل 5 Ct کمتر از لوله‌ی wild باشد، فرد برای جهش v لایدن هموزیگوت بیمار است.

  ج:اگر اختلاف Ct بین دو لوله سالم و بیمار کمتر از ۲ واحد باشد، فرد برای جهش v لایدن هتروزیگوت است. 

   

  2. چنانچه نمونه در کانال قرمز دارای منحنی سیگموئیدی و فاز لگاریتمی باشد:

  الف: اگر لوله‌ی wild حداقل 5 Ct کمتر از لوله‌ی mutant باشد، فرد برای جهش فاکتور II پروترومبین هموزیگوت سالم است.

  ب: اگر لوله‌ی mutant حداقل 5 Ct کمتر از لوله‌ی wild باشد، فرد برای جهش II پروترومبین هموزیگوت بیمار است.

  ج:اگر اختلاف Ct بین دو لوله سالم و بیمار کمتر از ۲ واحد باشد، فرد برای جهش II پروترومبین هتروزیگوت است. 

   

  از آنجا که هر فرد یکی از آلل‌های نرمال و یا جهش یافته و یا هر دوی آنها را دارا می باشد، بنابراین همیشه نتیجه آزمایش باید حداقل برای یكی از انواع نرمال یا جهش یافته مثبت باشد. بنابراین، این آلل ها در واقع به عنوان کنترل داخلی ایفای نقش می کنند. در صورتی که برای نمونه ای، سیگنالی در کانال زرد و یا نارنجی یا قرمز دیده نشود و یا منحنی مربوط به آنها سیگموئیدی نباشد، آزمایش نامعتبر بوده و باید دوباره تکرار شود. 

  جدول تفسیر نتایج 

   

  Result		Ct∆ (Ct2-Ct1)	Mutant Mix	Wild Mix	Chanel
  هموزیگوت سالم		5 < ∆Ct	Ct2	Ct1	Orange Factor v
  هموزیگوت جهش‌یافته		Ct < -5∆
  هتروزیگوت سالم		-2 < Ct < +2∆
  هموزیگوت سالم		5 < Ct∆	Ct2	Ct1	Red Factore II
  هموزیگوت جهش‌یافته		Ct < -5∆
  هتروزیگوت سالم		-2 < Ct < +2∆