cropped logo no background
Quality is Our Priority

کیت تشخیصی HBV

درباره بیماری:

هپاتیت B، نوعی بيماری عفونی ويروسی در انسان است كه عامل آن Hepatitis B virus (HBV)  است. اين ويروس از طریق مایعات بدن، خون، مقاربت جنسی و در ماه‌های آخر حاملگی از مادر به جنین منتقل می‌شود. در ۵ تا ۱۰ درصد مبتلایان تبدیل به حالت مزمن می‌شود و گاهی منجر به سرطان کبد می‌گردد. این ویروس ۳ روز پس از ورود به سلول‌های کبدی شروع به تکثیر می‌نماید؛ اما علایم بالینی بعلت نا معلوم، بسته به راه ورود، مقدار ویروس و وضعیت فرد مبتلا، حدود ۴۵ روز بعد ظاهر می‌شود.

عفونت هپاتیت B به 2 صورت دیده می شود:

  1. حاد: زمانی که فرد برای اولین بار به HBV آلوده می شود به عفونت حاد مبتلا می گردد. اما خوشبختانه در 80% بیماران بزرگسال مبتلا به HBV، این و عفونت از بدن آنها پاک می شود و آنها بهبود پیدا می کنند.
  2. مزمن: اگر به مدت شش ماه یا بیشتر عفونت در بدن بیمار باقی بماند و از بدن پاک نشود، بیمار به هپاتیت B مزمن مبتلا است. هپاتیت B مزمن مشکلات جدی تری ایجاد می کند و می تواند سبب مرگ شود. درمان به موقع می تواند پیشرفت بیماری را کندتر کرده احتمالا ابتلا به سرطان کبد را کاهش دهد. کمتر از 10 درصد بزرگسالان بيماري را به شکل مزمن نشان مي‌دهند، درحالی‌که اين رقم در کودکاني که در موقع تولد آلوده‌شده‌اند به 90 درصد و در نوجوانان به 30 – 25 درصد مي‌رسد. گزارش‌ها نشان داده است که 90 درصد افراد مبتلابه ايدز به هپاتيت نيز آلوده‌شده‌اند و از اين تعداد 15 درصد، آن را به شکل مزمن نشان مي‌دهند. اين بيماري شایع‌تر و بسيار مسري‏ تر از ايدز است.

شماره رفرانس

  • BONHBV-24
  • BONHBV-48

شرح کیت 

کیت تشخیصی HBV برای شناسایی و سنجش کمی  ویروس هپاتیت B (ژنوتیپ های A-G) در پلاسما با استفاده از فناوری Real-time PCR روش TaqMan طراحی شده است.این کیت نه تنها قادر به تشخيص صحيح و عاري از خطاي ويروس هپاتيت B مي باشد بلکه مي تواند انواع تيپ هاي ويروس را بدون تفاوت در تيپ آن شناسايي و تعيين مقدار کند. شناسايي بر اساس محلي از ژنوم ويروس انجام می شود که در بين همه تيپ­ هاي ويروس هپاتيت B مشترک بوده و نرخ جهش در آن به نسبت ديگر نقاط توالي ژنومي ويروس هپاتيت B پايين­تر است که اين امر تضمين ­کننده تشخيص و تعيين مقدار صحيح اين ويروس می­ گردد.

کیت تشخیصی HBV با تعیین دقیق مقدار کمی ویروس هپاتیت B در امر پایش بیماری هپاتیت B چه از نظر تعیین مقدار دوز داروی مصرفی توسط بیمار و یا تغییر دارو در حالاتی که بیمار نسبت به داروی مورد مصرف مقاومت پیدا کرده کاربرد دارد. نتایج حاصل از آزمایش‌ این کیت تنها در کنار شواهد بالینی، برای تشخیص مستند است. تشخیص قطعی و درمان بیماران باید بر اساس ترکیب نتیجه این آزمایش با نتایج آزمایش‌های دیگر و سابقه پزشکی و همچنین نحوه پاسخ‌دهی به درمان صورت گیرد.

موارد کاربرد:

این کیت در شناسایی و سنجش کمی ژنوتیپهای A-G ویروس هپاتیت B در پلاسما در آزمایشگاهها و بیمارستانها کاربرد دارد. کیت تشخیص کمی HBV سین مورو دارای ویژگیهای زیر می باشد:

اختصاصیت بالا

طراحی شده براساس ناحیه‌ی محافظت شده‌­ی ژنوم

  • قابلیت تشخیص همه­­‌ی ژنوتیپ‌های یافت شده و موجود در بانک داده‌های NCBI
  • دارای اختصاصیت 100%

تشخیص دقیق کمی

  • قابلیت تشخیص کمی ویروس HBV بر اساس آنتی‌ژن سطحی
  • کمی‌سازی کاملا دقیق و قابل ردیابی بر اساس سرم استاندارد HBV , AcroMetrix

کنترل داخلی اگزوژن

  • کنترل کلیه‌­ی فرآیند PCR و استخراج از طریق کنترل داخلی (IC) موجود در کیت

حساسیت بالا

  • حداقل توان تشخیص 25.3IU/ml (95 % confidence interval: 21.3 – 35.7 IU/ml)   

مسترمیکس آماده­‌ی مصرف

  • مستر میکس آماده‌­ی مصرف، حاوی تمامی مواد تشکیل دهنده­‌ی مورد نیاز برای واکنش PCR
  • تضمین تکرار پذیری نتایج آزمایش
  • سازگار با طیف گسترده‌ای از دستگاه‌های Real-time PCR از جمله، Rotor Gen 3000,6000، MIC و ABI Quantstudio Real-time PCR System

در صورت بروز مشکل لطفا به جدول زیر مراجعه نمایید و در صورت عدم رفع اشکال با پشتیبانی فنی تماس حاصل نمایید.

آنالیز اطلاعات

 آنالیز نتایج باید به صورت زیر تفسیر کرد:

  1. سیگنال فلورسانس در کانال (A.FAM=green) کاملا مشخص است.

نتیجه تست برای ویروس هپاتیتB مثبت است و نمونه تخلیص شده از پلاسما حاوی ویروس هپاتیت B بوده است. در این حالت، وجود سیگنال فلورسانس در کانال Orange(Texas Red) اهمیت ندارد زیرا در صورت بالا بودن غلظت اولیه ژنوم ویروس هپاتیتB سیگنال در کانال Orange میتواند بسیار ضعیف باشد یا اصلا وجود نداشته باشد.

  1. هیچ سیگنال فلورسانسی در کانال (A.FAM=Green channel) مشاهده نمیشود. در همین حین سیگنال در کانال  Orange(Texas Red)مربوط به کنترل داخلی قابل مشاهده است.

این حالت نشان دهنده عدم وجود ویروس هپاتیتB در نمونه پلاسما میباشد. همچنین مثبت بودن سیگنال حاصل از کانال Orange وجود هر گونه مهار کننده واکنش PCR  را منتفی میکند.

  1. هیچ سیگنال فلورسانسی در کانال A.FAM و کانال Orange(Texas Red) قابل مشاهده نیست.

در این حالت هیچ گونه نتیجه گیری در مورد تست نمیتوان انجام داد. تست باید دوباره تکرار شود.

اقدام اصلاحیدلیل بروز مشکلمشکل
استخراج ِDNA با برخی از کیت ها ممکن است همراه با برخی ناخالصی هایی باشد که با مسترمیکس واکنش مهاری دهداستخراج DNAهیچ سیگنالی دریافت نشده ولی کنترل مثبت سیگنال دارد.1
واکنش را مجدد روی کنترل مثبت کیت تکرار کنید تا از مشکل مسترمیکس اطمینان حاصل کنید.مشکل از مستر میکس می باشدهیچ سیگنالی از هیچ کانالی دریافت نمی شود (حتی در نمونه استاندارد و کنترل داخلی کیت نیز هیچ سیگنالی رویت نشده)2
از نحوه run دستگاه و همچنین سلامت دستگاه اطمینان حاصل کنید.مشکل از دستگاه یا نرم افزار آن می باشد
با سفیدکننده 10% تمام سطوح هود را تمیز کنید و به مدت 20 دقیقه سفید کننده 10% بگذارید روی سطوح بماند و سپس به مدت 20 دقیقه UV را روشن کنید.آلودگی فضای هود یا work station  که میکس اولیه آماده می گردد.رویت سیگنال در نمونه کنترل منفی3
امکان دارد طی روند کار به هر علتی سمپلر هود تمیز شما مقداری آلودگی داشته باشد برای رفع آلودگی بیرون و داخل سمپلر را با وایتکس 10% خوب تمیز کنید و سمپلرها را زیر UV به طریقی که سر انها UV بخورد قرار دهید/ هرگز از سمپلر مشترک که برای نمونه بیمار یا کنترل مثبت استفاده میکنید جهت درست کردن میکس اولیه استفاده نکنید.مشکل از سمپلر آلوده یا مشترک می باشد
توجه داشته باشید که برای انجام تست باید دو فضای مجزا ( هود مجزا) برای میکس اولیه و اضافه کردن نمونه بیمار داشته باشید.استفاده از یک فضا جهت PCR
برای جلوگیری از این اتفاق دفعه اول به اندازه مورد نیاز هر بار استفاده پرایمر و پروب ها را الکوت کنید در غیر این صورت اگر طی دو-سه روز کل کیت مصرف می شود پرایمر ها را در دمای 4 درجه نگهداری کنید.پرایمر و پروب ها بیش از 2 بار فریز و دفریز شدند.شدت فلورسنت کم است4
در صورت امکان دوباره فرآیند استخراج DNA و یا نمونه گیری را تکرار کنید.کیفیت DNA استخراج شده مناسب نیست.سیگنال فلورسنت حالت سیگموئیدی ضعیفی دارد5
برای دستگاه Qiaqen (کوربت ) گزینه outlier removal را طبق شرایط بهینه نمونه روی 5% یا 10% بگذارید.نرم افزار دستگاهگرفتن سیگنالهای خطی (noise)6

 

 

جهت مشاوره می توانید با اطلاعات مدرج در صفحه تماس با ما ارتباط حاصل فرمایید.