کیت تشخیصی MTHFR31/33

محصولات مرتبط: کیت MTHFR، کیت دابلکس تعیین جهش MTHFR31/33، کیت ریل تایم تعیینA1298C و C677T، کیت ریل تایم جهشهای MTHFR

آنزیم متیلن تتراهیدروفولات ردوکتاز (MTHFR) یکی از اجزای اصلی متابولیسم اسید فولیک و سنتز هموسیستئین است که توسط ژن MTHFR کد می‌شود. بروز تغییرات ژنتیکی در این ژن ممکن است باعث تغییر و تبادل اسید‌های آمینه شده و بر فعالیت آنزیم تاثیر بگذارد. کاهش فعالیت این آنزیم منجر به تغییراتی در سنتز متیونین از هموسیستئین می‌شود. با توجه به این که تجمع هموسیستئین ممکن است باعث بیماری‌های مختلفی از جمله ترومبوز، تصلب شرایین و نقص لوله‌ی عصبی در دوران جنینی شود، شناسایی جهش‌ها و تغییرات ژنتیکی در ژن MTHFR از اهمیت فراوانی برخوردار است.

شایع‌ترین جهش‌های نقطه‌ای در ژن MTHFR در جایگاه‌های 677 و 1298 این ژن واقع شده‌اند که به ترتیب شامل جایگزینی نوکلئوتید‌های C به T و A به C می‌باشند.

جهش C677T باعث تبدیل آمینواسید آلانین به آمینواسید والین در جایگاه ۲۲۳ توالی پروتئینی آنزیم می‌شود و فعالیت آن در افراد با ژنوتیپ هموزیگوت بیمار (TT)،  ۵۰ تا ۶۵ درصد کاهش می‌یابد. همچنین  جهش A1298C سبب جابه جایی آمینواسید گلوتامیک‌اسید و آلانین می‌شود و اگرچه نسبت به جهش C677T فعالیت آنزیم‌ را به میزان کمتری تحت تاثیر قرار می‌دهد (حدود ۱۵ تا ۳۰ درصد)، اما این جایگزینی نیز با ترومبوز و احتمال سقط جنین در ارتباط است. در واقع، هر دو ژنوتیپ واریانت C677T و A1298C  با کاهش فعالیت آنزیمی همراه هستند اما ژنوتیپ C677T دارای اثر شدیدتری نسبت به نوع A1298C است. داشتن یک نوع (هتروزیگوت) کمتر سبب مشکلات سلامتی می گردد. اما داشتن دو جهش (هموزیگوت) ممکن است منجر به مشکلات جدی تری شود. 

جهش های MTHFR A1298C با سطوح بالاتر فیبرومیالژیا، IBS، خستگی، درد مزمن، اسکیزوفرنی و مشکلات مربوط به خلق و خوی مرتبط است. این امر به ویژه در صورتی صادق است که شما جهش را از هر دو والدین به ارث برده باشید. 

جهش C677T نیز فراتر از بیماری قلبی با چندین نوع علائم مختلف از جمله خستگی، درد مزمن، مه مغزی، افسردگی و اضطراب، غلبه استروژن و سردرد همراه است.

شماره رفرانس

BONMTHFR-24

BONMTHFR-96

شرح کیت

این کیت در دو تیوب بر اساس واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) به صورت Real-Time ساخته شده است. این محصول برای تشخیص جهش‌های نقطه‌ای C677T و A1298C ژن MTHFR در شرایط آزمایشگاهی تهیه شده و نتایج تشخیصی به‌دست‌آمده توسط این محصول باید همراه با سایر داده‌های بالینی یا آزمایشگاهی تفسیر شوند.

اصول

تشخیص جهش های نقطه‌ای C677T و A1298C ژن MTHFR توسط واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) بر اساس تکثیر مناطق خاص ژنوم انسان می­باشد. در واکنش Real-Time PCR محصول تکثیر شده از طریق فلوروسنت شناسایی می‌شوند. مشاهده شدت فلوروسنت در حین واکنش PCR (به صورت Real-Time) تشخیص محصولات در حال تکثیر را بدون نیاز به باز­کردن مجدد لوله­ های واکنش پس از اجرای PCR ممکن می‌سازد. این کیت در قالب یک پلتفرم دو لوله ای مولتی پلکس شامل دو ست پرایمر و پروب طراحی شده است که قادر به تشخیص همزمان افتراقی دو الل سالم و بیمار برای دو جهش ژن MTHFR (C677T و A1298C) به ترتیب با فلوروفورهای HEX و FAM می باشد.

موارد کاربرد

این کیت در شناسایی همزمان جهشهای ژن MTHFR به ویژه در افرادی که سابقه افزایش هوموسیستین، سقط جنین مکرر، ناباروری، پره‌اکلامپسی، فرزندی مبتلا به سندرم داون، اوتیسم، افسردگی پس از زایمان، افسردگی مزمن یا سابقه‌ی خانوادگی هر یک از این مشکلات را دارند، کاربرد دارد.

کیت MTHFR بن یاخته واجد ویژگیهای زیر است: 

اختصاصیت بالا و تشخیص دقیق

• طراحی شده براساس دو ناحیه‌ی جهش یافته ژن MTHFR
• دارای اختصاصیت 100% و تشخیص دقیق هموزیگوتها و هتروژیگوتها بر اساس اختلاف Ct داده شده برای 2 جهش شایع MTHFR به طور همزمان

کنترل داخلی 

• از آنجا که فرد همیشه برای یکی از آللهای نرمال و یا جهش یافته باید مثبت باشد، کنترل داخلی در کیت لحاط نشده است.

حساسیت بالا

• حساسیت کیت برابر 1 نانوگرم در واکنش است.

مسترمیکس آماده­‌ی مصرف

• 2 مستر میکس نرمال  و جهش یافته در دو کانال سبز و کانال زرد حاوی تمامی مواد تشکیل دهنده‌­ی مورد نیاز برای واکنش PCR
• بدون نیاز به اضافه کردن مواد ضروری برای انجام تست PCR
• تضمین تکرار پذیری نتایج آزمایش
• سازگار با طیف گسترده ای از دستگاه‌های Real-time PCR از جمله، Rotor Gen 3000,6000، MIC و ABI Quantstudio Real-time PCR System

آنالیز نتایج

آنالیز نتایج توسط نرم افزار مربوطه و بر اساس دستورالعمل دستگاه انجام شود. در کانال رنگی سبز و زرد، آستانه را روی گزینه‌ی Auto قرار دهید.

آنالیز نتایج بر اساس محاسبه‌ی اختلاف Ct بین دو لوله‌ی wild  و mutant انجام می‌شود. 

1. چنانچه نمونه در کانال زرد دارای منحنی سیگموئیدی و فاز لگاریتمی باشد:

الف: اگر لوله‌ی wild حداقل 5 واحد Ct کمتر از لوله‌ی mutant باشد، فرد برای جهش C677T هموزیگوت سالم است.

ب:  اگر لوله‌ی mutant حداقل 5 واحد Ct کمتر از لوله‌ی wild باشد، فرد برای جهش C677T هموزیگوت بیمار است.

ج: اگر اختلاف Ct بین دو لوله سالم و بیمار کمتر از ۲ واحد باشد، فرد برای جهش C677T هتروزیگوت است. 

2. چنانچه نمونه در کانال سبز دارای منحنی سیگموئیدی و فاز لگاریتمی باشد:

الف: اگر لوله‌ی wild حداقل 5 واحد Ct کمتر از لوله‌ی mutant باشد، فرد برای جهش A1298C هموزیگوت سالم است.

ب: اگر لوله‌ی mutant حداقل 5 واحد Ct کمتر از لوله‌ی wild باشد، فرد برای جهش A1298C هموزیگوت بیمار است.

ج:اگر اختلاف Ct بین دو لوله سالم و بیمار کمتر از ۲ واحد باشد، فرد برای جهش A1298C هتروزیگوت است.