کیت استخراج نمونه های بافتی HPV

کیت استخراج نمونه های بافتی HPV می تواند برای خالص سازی موثر DNA ویروسی از سواپ های دهانه رحم استفاده شود و برای حد  تشخیص مولکولی پایین مناسب می باشد. 

عفونت با ژنوتیپ های ویروس پاپیلومای انسانی انکوژن (HPV) عامل اصلی بروز سرطان دهانه رحم است. آزمایش DNA HPV از نمونه‌های دهانه رحم می‌تواند به عنوان مکمل غربالگری سیتولوژیک سنتی استفاده گردد. بنابراین استخراج DNA با بازدهی بالا جهت به حداکثر رساندن کارایی تشخیص DNA HPV مورد نیاز است. بعد از استخراج DNA از نمونه زیستی، می توان از آن در فرآیند های آزمایشگاهی از قبیل تست های PCR، توالی یابی و متیلاسیون استفاده نمود.

مزایای کیت استخراج نمونه های بافتی HPV

• عدم استفاده از حلال های آلی که برای سلامت انسان خطرناک است.
• استخراج DNAبا راندمان بالا
• استخراج DNA از کمترین مقدار نمونه زیستی
• روش استفاده ساده و سریع
• قیمت عالی
• پشتیبانی 24 ساعته از طریق واتس اپ و تلگرام (قسمت تماس با ما مراجعه نمایید)

شماره رفرانس

• BONEX-50
• BONEX-100

شرح کیت

کیت Extraction SENMURV Nucleic Acid  جهت استخراج DNA  ویروس HPV  طراحی شده است. DNA استخراج شده قابل برش توسط آنزیم های محدود کننده بوده و متناسب جهت کاربردهای مولکولی نظیر PCR  می‌باشد.

ویژگی ها

ویژگی های Extraction Kit SENMURV Nucleic Acid به صورت مختصر در جدول زیر خلاصه شده است:

جدول 1: ویژگی های Extraction Kit SENMURV Nucleic Acid

پروتکل

جداسازی DNA ویروسی (بر پایه ی تکنولوژِی سیلیکا)

نوع نمونه:

• سواپ دهانه رحم

شرایط نگهداری و پایداری

• ستون ها درکیسه های زیپ دار بسته بندی شده‌ اند و در دمای اتاق (18-25 درجه سانتی گراد) تا پایان تاریخ انقضا کیت پایداری خواهند داشت.
• همه محلولها شفاف هستند و در صورت تشکیل رسوب نباید از آنها استفاده کرد.
• محلول ها را در دمای (18-25 درجه سانتی گراد) و یا در حمام آب 37 درجه سانتی گراد گرم کنید تا رسوبات حل شوند.
• درب بافرها را بلافاصله بعد از استفاده ببندید.

توجه: نگه داری در دمای 2-8 درجه سانتی گراد (یخچال) یا 25- تا 15- درجه سانتی گراد (فریزر) به دلیل تشکیل رسوب در محلول ها، تاثیر منفی بر روی تخلیص DNA خواهد گذاشت.

نکات مهم قبل از شروع کار

• تمامی مراحل سانتریفیوژ در دمای اتاق (18-25) درجه سانتی گراد انجام می­شود.
• از چرخه انجماد ذوب خودداری شود.
• قبل از شروع کار دمای نمونه به دمای محیط برسد و سپس فرایند آغاز گردد.
• قبل از استفاده، بافرها را کاملا همگن کنید.
• در صورتی که در بافر LB رسوب دیده شد، حتما قبل از شروع کار آن را در حمام آب گرم 56 درجه سانتی گراد قرار دهید تا رسوب کاملا حل شود.
• پروتئیناز k را قبل از استفاده ورتکس کنید.
• محلول ها و نمونه ها را با دقت بدون تماس با دیواره و لبه ها به مرکز غشا ستون اضافه نمایید.
• بعد از هر انتقال مایع به وسیله سمپلر، سرسمپلر باید تعویض گردد. استفاده از سرسمپلر فیلتردار برای کاهش آلودگی احتمالی توصیه می گردد.
• از تماس نوک سرسمپلر با غشا ستون خودداری کنید.
• توصیه می شود بعد از pulse-vortexing تیوب ها را اندکی سانتریفیوژ کنید تا قطرات مایع از درب تیوب ها جدا شوند.
• به منظور جلوگیری از تشکیل آئروسل، درب ستون ها را در طول سانتریفیوژ ببندید.

تجهیزات و مواد مورد نیاز که باید فراهم شوند:

• سرسمپلر µl 10-100 و µl100-1000 و سرسمپلر(RNase, DNase-free)
• میکروتیوبml 5 و ml 2 (RNase, DNase-free)
• ورتکس
• اتانول 100%
• ترموبلاک
• میکروسانتریفیوژ
• PBS (1X)
• کالکشن تیوب ml2

نکات ایمنی

• بافرهای LB و WB1 حاوی نمک های گوانیدین می باشند، از این رو هنگام استفاده از آن ها احتیاط نمایید. نمک های گوانیدین با محلول های سفید کننده واکنش نشان می دهند.
• در تمام مراحل دستکش بپوشید و در صورت تماس بین دستکش و نمونه، آن را فوراً عوض کنید.
• از برخورد بافرها با چشم و پوست خودداری کنید.
• هنگام کار، از دستورالعمل های توصیه شده برای کار با مواد زیستی خطرناک پیروی کنید.

آماده سازی بافرها

Proteinase k

بافر نگه دارنده PK (PK buffer)  را به میکروتیوب حاوی پروتئیناز k اضافه کرده و به مدت 20 ثانیه به خوبی ورتکس کنید، آنزیم پروتئیناز k آماده مصرف می باشد.

توجه داشته باشید آنزیم آماده شده باید دردمای -20 درجه سانتی گراد نگه داری شود.

توجه: سایر بافرهای این کیت آماده مصرف می باشند.

فرآیند

• جهت تغلیظ ، نمونه را در× g 10000-12000  به مدت 2-4 دقیقه سانتریفوژ کرده، مایع رویی را خارج نموده و از رسوب باقیمانده به همراه µl 200 مایع رویی جهت فرایند استخراج استفاده نمایید.
• میزان 15 µL پروتئیناز k را به نمونه اضافه کرده و به خوبی ورتکس کنید.
• میزان µL 200 بافر LB را به نمونه اضافه کنید و به مدت 15 ثانیه ورتکس نمایید تا کاملا مخلوط شوند. میکروتیوب را اندکی سانتریفیوژ کنید تا قطرات مایع از درب تیوب جدا شوند، و سپس به مدت 15 دقیقه در دمای 56 درجه سانتی گراد انکوبه نمایید. در طول زمان انکوباسیون، تیوب را چندین مرتبه در فواصل زمانی مختلف ورتکس کنید.
• میزان µL 300 اتانول%  100را به نمونه اضافه کنید و به مدت 15 ثانیه Pulse-vortex نمایید تا کاملا مخلوط شوند. میکروتیوب را اندکی سانتریفیوژ کنید تا قطرات مایع از درب تیوب جدا شوند.
• تمام محلول حاصل از مرحله قبل را بدون تماس با دیواره و لبه ها به ستون (متصل شده به کالکشن تیوب) اضافه کنید و آن را در × g 8000  به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کنید. کالکشن تیوب و مایع عبوری را دور ریخته و ستون رادر کالکشن تیوب جدید قرار دهید.
• میزان µL 700 بافر WB1 را اضافه کرده و در × g 8000 به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کنید. کالکشن تیوب و مایع عبوری را دور ریخته و ستون رادر کالکشن تیوب جدید قرار دهید.
• میزان µL 700 بافر WB2 را اضافه کرده و در × g 8000 به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کنید. کالکشن تیوب و مایع عبوری را دور ریخته و ستون را در کالکشن تیوب جدید قرار دهید.
• ستون را با حداکثر سرعت (13000rpm) به مدت 3 دقیقه سانتریفیوژ نمایید. انجام این مرحله از انتقال بافر WB2 به مرحله الوشن جلوگیری می کند.
• کالکشن تیوب و مایع عبوری را دور ریخته وستون را بر روی کالکشن تیوبml 5  جدید (باید توسط کاربر فراهم شود) قرار دهید. با احتیاط کامل درب ستون را باز کرده و میزان 40-60 میکرولیتر بافرEB    را به مرکز ستون اضافه نمایید. ستون را به مدت یک دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید و سپس در × g 12000 به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کنید.
• انکوبه کردن ستون با درب بسته در دمای 56 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه، افزایش راندمان استخراج DNA رابه همراه خواهد داشت.
• DNA استخراج شده را در دمای 20- درجه سانتی گراد ذخیره نمایید.

کنترل کیفیت

تمام اجزا و سری ساخت های (LOT NO.) هر کیت در واحد کنترل کیفیت شرکت بنیاخته بر اساس معیارهای مدون از پیش تعیین شده، جهت اطمینان از صحت محصول مورد ارزیابی قرار گرفته است.